紅茶菌是由紅茶(或用綠茶和烏龍茶)、白糖(或冰糖、蜂蜜)和水釀製而成。其培養方法可以分為培養液的製作與接種培養：（1）培養液的製作：A、按比例把茶葉，潔淨水，白糖稱取；B、茶葉用白紗布包好；C、水放鋁鍋或鋼精鍋燒開殺菌；D、把茶葉包放入開水2--3分鐘，撈出來；E、放入白糖使溶化；F、把茶葉水離火冷卻到35度以下即可。
（2） 接種培養：在消毒過的大口玻璃瓶裏或者瓷缸裏培養，把母液加入適量沖洗內壁後到掉，再把好的母菌液，菌膜加入培養瓶，把涼涼的培養液加入培養瓶，用紗布封口防蟲，及灰塵。把培養瓶放陽光沒有直射的地方培養，温度高發酵快，温度低發酵慢，一般在30度至35度一個星期左右，菌液表面結成乳白色新鮮菌膜，培養液即發酵成甜酸的紅茶菌液，即可飲用。
紅茶菌液不要飲完，留下部分菌液亦可繼續如上法培養飲液，循環不絕。培養紅茶菌的原料比例是紅茶：糖：水=0.2：5：200。
